Wave System (DHPLC)

ADS BIOTEC (TRANSGENOMIC) 基因分析 

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    Wave System (DHPLC)

 Wave System (DHPLC)
醫學中遺傳疾病檢測的最佳利器


在醫學中分子檢測領域,針對單一基因突變分析、已知疾病基因突變測試、全基因突變掃瞄,若以直接定序方式,常耗時且費力。美國Transgenomic所生產的Wave System (DNA突變分析儀),其採用專利DNA Sep Column,配合超強軟體Navigator Software 和精準溫控系統,利用Heteroduplex Analysis或Primer Extension Analysis 方式檢測基因突變 ,靈敏度比Direct Sequencing還高,且具有省時,省成本的特性;尤其針對少量突變,如Mitochondria Analysis、Tumor Samples、Somatic Mosaics,只要有5%變異即可偵測;靈敏度高達98%以上,並獲得英國臨床分子基因診斷協會CMGS (Clinical Molecular Genetic Society)和美國醫藥基因學會ACMG(American College of Medical Genetics)認可,訂定標準及指導原則。

解離式高效能液相層析儀(DHPLC)核酸分離原理

DHPLC
是利用離子配對逆向層析的原理,主要是利用離子配對試劑 TEAA ( triethyl-ammonium acetate ) 的氨基與 DNA 的磷酸基( PO3- ) 形成離子配對,在流動相中帶正電的 TEAA 氨基會將表面帶負電 DNA 包覆,並以非極性的乙烷基端吸附在含有18個碳的烷基的非極性固定相上,此固定相與具有專利之聚合物基質( polystyrene-divinylbenzene, PSDVB ) 藉由化學鍵共價結合。雙股DNA 在分離管柱中的滯留與否,主要決定於 TEAA 中帶正電氨基和 DNA 中帶負電磷酸基的結合,藉由 TEAA 中非極性的乙烷基端吸附在管柱的非極性固定相上。若 DNA 長度越長,就帶有越多磷酸基,因此有較多的 TEAA 結合,使其在管柱滯留的時間越長 ( 如下圖所示 ) 。當流動相中之 Acetonitrile 濃度增加時,DNA/TEAA錯合物與管柱表面固定相之間的結合力受到破壞,而使 DNA 分子隨流動相流析出而達到分離效果。


Wave System (DNA突變分析儀應用範圍) Disease遺傳疾病, 如:
1) 肌肉萎縮症(DMD, BMD): DMD 基因
2) 遺傳性血色沈著症: HFE基因
3) 纖維囊泡症(Cystic Fibrosis): CFTR 基因
4) Usher Syndrome: USH3 基因
5) Rett Syndrome: MECP2 基因
6) Noonan Syndrome: PTPN11基因
B: Cancer癌症, 如:
1) 乳癌、卵巢癌: BRCA2, BRCA1, p53基因
2) 大腸癌:APC, MLH1/3, MSH2 基因
3) 肺癌: GSTP1, GSTM1, NE基因
4) 胃癌:C-Kit, E-cadherin 基因
5) 血癌:p53, NBS1, TCR 基因
6) 前列腺癌:p73, HSP70B 基因
7) 神經母細胞癌:Patched-2, p73 基因
8) 腎臟癌:PKD1/2, MET 基因
C: Infectious Disease感染性疾病, 如:
1) 微生物鑑定分類: r-RNA基因
2) 抗藥性基因檢測:肺結核分歧桿菌 rpoB, katG, pncA, rpsL, embB 基因
3) 抗藥性基因檢測: 沙門氏桿菌 gyr A
D: Others 其他應用, 如:
1) 家族性心肌肥大症(FHLM): MYH7, PRKAG2基因
2) 家族性初期肺動脈高壓(FPPH): BMPR2基因
3) 家族性偏頭症及偶發性神經失調症2型(FHM&E2-2): CACNAIA, CACNL1A4 基因
4) 乙型地中海貧血: β-globin基因
5) 巴金森氏症(Alport Syndrome): COL4A3基因
6) 阿茲海默症(Alzheimer Disease): Codon206(Gly206) in exon 7 of Presenilin 1
7) 精神分裂症(Schizophrenia): DDC, AADC, NTS, NTSR1, NFT3 基因
8) Cadasil症候群:NOTCH3 基因
9) Marfan症候群:FBNI基因
10) 粒腺體遺傳疾病如LHON, MERRF, MELAS等